sekvenciranje DNA
U sekvenciranju DNA koriste se biokemijske metode za određivanje slijeda nukleotida (molekula DNA baze sa šećerom i fosfatom) u molekuli DNA. Najčešće korištena metoda je metoda prekida lanca Sanger. Budući da se DNK sastoji od četiri različite baze, napravljena su četiri različita pristupa.
Svaki pristup sadrži DNA koju treba sekvencirati, početnik (početna molekula za sekvenciranje), DNA polimerazu (enzim koji produžuje DNA) i smjesu sva četiri potrebna nukleotida. Međutim, u svakom od ova četiri pristupa različita baza kemijski je modificirana na takav način da se može ugraditi, ali ne pruža točku djelovanja za DNA polimerazu. To onda dovodi do prekida lanca. Ovom metodom dobivaju se fragmenti DNA različitih duljina, koji se zatim kemijski odvajaju takozvanom gel elektroforezom prema njihovoj duljini. Rezultirajuće sortiranje može se prevesti u slijed nukleotida u sekvenciranom DNA odjeljku obilježavanjem svake baze drugom fluorescentnom bojom.
DNA hibridizacija
DNA hibridizacija molekularno je genetska metoda koja se koristi za dokazivanje sličnosti između dva pojedinačna lanca DNA različitog podrijetla. Ova metoda koristi činjenicu da se dvostruki lanac DNA uvijek sastoji od dva komplementarna pojedinačna lanca. Što su obje pojedinačne niti sličnije jedna drugoj, to više baza tvori čvrstu vezu (vodikove veze) s suprotnom bazom ili se stvara više parova baza.
Neće se dogoditi uparivanje baza između presjeka na dva lanca DNA koji imaju drugačiji redoslijed baza. Relativni broj spojeva sada se može odrediti određivanjem točke taljenja na kojoj se odvaja novonastali dvostruki lanac DNA. Što je temperatura topljenja viša, više komplementarnih baza stvara međusobno vodikove veze i više su slične dvije pojedinačne niti. Ova se metoda također može koristiti za otkrivanje određene sekvence baze u smjesi DNA. U tu svrhu umjetno oblikovani fragmenti DNA mogu se obilježiti (fluorescentnom) bojom. Oni tada služe za označavanje odgovarajućeg osnovnog niza i na taj ga način mogu učiniti vidljivim.
Svi članci iz ove serije:
