Singl-gen analiza je ciljana metoda genetskog ispitivanja.
U okviru ovog postupka, ako se sumnja na nasljednu bolest koja je pokrenuta jednom promjenom a gen, ispituje se gen za koji se sumnja da je uzročan. To se također često radi rutinski u sklopu probirnih pregleda.
Indikacije (područja primjene)
- Dijagnoza monogenskih bolesti npr cistična fibroza.
postupak
Potreban materijal
- Heparinska krv (minimalno 1-2 ml)
Priprema pacijenta
- Nije potrebno
Ometajući čimbenici
- Nije poznato
Laboratorijska metoda
Najčešće se metoda sekvenciranja koja se koristi ugen Analiza je Sangerova metoda, koja se naziva i sintezom završetka lanca, gdje prvo dolazi do izolacije DNA iz krv. Onda, svi vodik veze koje služe za držanje dvolančane DNA zajedno se prekidaju. Nakon zagrijavanja na 94-96 ° C tijekom jedne minute, prisutne su dvije pojedinačne niti. Dalje, dolazi do takozvane hibridizacije prajmera, pri čemu je priključen primer. To se događa na oko 60 ° C. Primer je oligonukleotid (oligomeri sastavljeni od nekoliko nukleotida) koji služi kao početna točka za replikaciju DNA enzimi kao što je DNA polimeraza. Nakon hibridizacije početnice dolazi do ekstenzije u kojoj se temperatura povisuje na 72 ° C. To omogućuje da se početnica veže na DNA polimerazu (enzimi koji sintetiziraju DNA). Nakon prosječno 30 ciklusa postupak se može zaustaviti.
Daljnju analizu izvodi kapilara elektroforeza u automatiziranim sekvencerima. Rezultat se naziva elektroferogram. To pokazuje različite boje koje ukazuju na osnovni slijed.
Ovom metodom mogu se otkriti mutacije koje uključuju samo jednu nukleinsku bazu unutar gena, poznate i kao točkaste mutacije.
